定氮儀對(duì)黑豆?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)的提取與分析

　　1.引言

　　黑豆系被子植物，豆科，一年生作物。種皮為黑色的大豆稱為黑豆。大豆原產(chǎn)中國(guó)，種質(zhì)資源豐富，全國(guó)共搜集保存大豆22000 多份，其中黑豆2980 份，占全部大豆種質(zhì)資源的13.2%[1,2,3]。黑豆在全國(guó)各地都有栽培，尤以山西、河北、陜西栽培最多。民間老百姓主要將黑豆作為飼料來(lái)喂養(yǎng)牲畜，認(rèn)為人食用后不易消化，在山西北部用來(lái)加工豆腐等。

　　大豆生長(zhǎng)過程中除了形成高蛋白質(zhì)、高脂肪外，還能形成一類次生代謝物異黃酮，它在抗癌方面具有重要作用。實(shí)驗(yàn)還證明異黃酮可殺死兒童B 細(xì)胞先兆白血病和成人急性白血病的所有細(xì)胞[4,5,6,7]。但目前對(duì)黑豆的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、營(yíng)養(yǎng)成分以及開發(fā)利用的研究工作很少有報(bào)道。近年來(lái)，在日本黑豆的系列產(chǎn)品開發(fā)很多[8,9]，已經(jīng)成為中老年人預(yù)防與功能食品的一種重要選擇。在我國(guó)，隨著研究工作的深入，黑豆將會(huì)成為一種高級(jí)功能食品。

　　2.試驗(yàn)方法

　　2.1 供試材料、試劑與儀器及計(jì)算方法

　　2.1.1 原料：黑豆為山西省離石、平遙、長(zhǎng)治、靜樂、河曲與神池等地采集六個(gè)品種，對(duì)比分析所用為離石本地品種

　　2.1.2 試劑：無(wú)水乙醇、乙醚、四氯化碳均為分析純；硫酸（比重1，84）、硒粉（催化劑）、甲基紅+溴甲酚綠（染色劑）、蘆丁、薯蕷皂標(biāo)準(zhǔn)品。

　　2.1.3 儀器：JJ—2 型組織搗碎機(jī)、DF—101 集熱式恒溫加熱磁力攪拌器、DLSB—5/40 型低溫冷卻液循環(huán)泵、RE—52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、SHB—ⅢA 循環(huán)水式多用真空泵、UV—1200 紫外可見分光光度計(jì)、S2F—06A 型脂肪測(cè)定儀、 D2F--#型真空干燥箱、TD18 電子分析天平、 KDN-04A全自動(dòng)定氮儀、7230G 可見分光光度計(jì)。

　　2.1.4 計(jì)算方法：

　�。�1）薯蕷皂、蘆丁的計(jì)算方法：

　　提取率（%）=（測(cè)量值×稀釋倍數(shù)×定容量/樣品重）×100

　　粗含量（%）Cx=（AxCs/As）×100

　　Cx 為樣品的濃度（mg/mL） Cs 為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（mg/mL）

　　Ax 為樣品的吸光度（Abs） As 為標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度（Abs）

　�。�2）粗蛋白的計(jì)算方法：

　　粗蛋白含量（%）=（V-Vo）×0.014×A×100/W

　　V—消耗氯化氫的毫升數(shù) V0—空白實(shí)驗(yàn)時(shí)消耗氯化氫的毫升數(shù)

　　N—氯化氫的當(dāng)量濃度 0.014—1ml 氯化氫的克當(dāng)量數(shù)

　　A—固定系數(shù) W—樣品重量

　�。�3）粗脂肪的計(jì)算方法：

　　準(zhǔn)確稱取 抽取 虹吸 烘干 稱重所得

　�。�4）總糖測(cè)定的計(jì)算方法：

　　含糖量（%）=c×10-6×1000/m=c/m

　　2.2 實(shí)驗(yàn)方法和過程：

　　將黑豆搗碎、烘干、研磨成粉末，用TD18 電子分析天平稱量一定量的粉末樣品。

　　2.2.1 薯蕷皂、蘆丁的測(cè)定：

　　準(zhǔn)確稱取各樣品一式三份，用65%的乙醇浸泡24 小時(shí)，然后用旋轉(zhuǎn)蒸餾的方法進(jìn)行濃縮、烘干干燥，析出深黃色的蘆丁和白色的薯蕷皂藥膏；用65%的乙醇稀釋、過濾、定容至5ml 容量瓶中。將定容后的溶液取5ml 稀釋定容至50ml 容量瓶,以65%乙醇溶液作參比,用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)得其吸光度并進(jìn)行計(jì)算。

　　2.2.2 蛋白質(zhì)測(cè)定

　　將樣品過篩， 準(zhǔn)確稱取各地樣品一式三份 加入少許硒粉與10 毫升硫酸，在消化爐中進(jìn)行消化40 分鐘 然后在定氮儀中進(jìn)行蒸餾（具體操作略），最后用0.1 摩爾的氯化氫滴定，記錄滴定所用氯化氫毫升數(shù)，按照公式計(jì)算蛋白質(zhì)含量。

　　3 結(jié)論

　　隨著定氮儀對(duì)對(duì)黑豆品種的進(jìn)一步研究、這將對(duì)黑豆粗加工、深加工提供了科學(xué)的依據(jù)；為將來(lái)黑豆系列的食品與功能食品的研究與開發(fā)指明了方向。